Điều kiện tiên quyết cho nền đen
Một vài điều kiện tiên quyết đơn giản sẽ loại bỏ hầu hết các vấn đề gặp trong kính hiển vi nền đen
1) Hãy chắc chắn tụ quang của bạn có số khẩu độ lớn hơn số khẩu độ của vật kính mà bạn sẽ sử dụng.
2) Quan sát hiển vi nền đen đòi hỏi một nguồn ánh sáng tốt. Do đó bạn phải loại bỏ tất cả các bộ lọc gắn vào đèn chiếu sáng.
3) Đảm bảo slide kính của bạn không quá dày hoặc quá mỏng, đặc biệt nếu bạn sử dụng một tụ quang trường tối có NA cao. Tụ quang này có tiêu cự cố định là khoảng cách mà tụ quang làm việc tối ưu. Các nhà sản xuất có thể khuyến nghị một độ dày slide nhất định hoặc giá trị này có thể được in trên tụ quang. Một slide tiêu chuẩn dày 1,2 mm, nhưng thậm chí trong cùng một hộp các slide có thể có độ dày khác nhau. Slide nên dày không quá ±0.05 mm so với độ dày được đề nghị. Bạn có thể xác định độ dày slide chính xác
cho tụ quang của bạn theo cách sau:
a) Chỉnh tụ quang ở vị trí cao nhất, đặt một slide, với một đầu mờ trên một mặt slide, mặt mờ phải đối diện với vật kính.
b) Kiểm tra bề mặt mờ với một vật kính độ phóng đại thấp (ví dụ: 10 X) .
c) Nếu hình ảnh cho thấy một điểm sáng với một trung tâm màu đen, slide hoặc là quá dày hoặc quá mỏng. Nếu chỉ có một điểm sáng nhỏ tức là slide có độ dày chính xác.
d) Nếu slide không đúng, hãy thử hạ tụ quang. Nếu trung tâm màu đen biến mất và điểm sáng nhỏ vẫn còn, tức là slide quá mỏng, nếu không là slide quá dày.
e) Kiểm tra độ dày của slide với một micromet và lặp lại quá trình này với các slide có độ dày khác nhau cho đến khi tìm được độ dày tối ưu.
Căn chỉnh trung tâm tụ quang nền đen
Nếu bạn đang sử dụng một tụ quang thông thường, căn chỉnh trung tâm tụ quang này để cho đèn Köhler chiếu sáng trong trường sáng phải đầy đủ để sử dụng trong thiết lập nền đen. Nếu bạn đang sử dụng một tụ quang nền đen với NA cao, bạn cần thực hiện các bước sau đây:
1) Chọn một độ phóng đại rất thấp (ví dụ 2 X hoặc 5X) .
2) Chỉnh lượng ánh sáng nhiều nhất có thể.
3) Bôi dầu tụ quang và nâng nó lên vị trí cao nhất dưới một slide trắng.
4) Nếu tụ quang có một vòng sáng nhỏ ở trung tâm, tập trung kính hiển vi trên vòng sáng này và
căn chỉnh trung tâm vòng sáng này này bằng cách sử dụng nút định tâm tụ quang. Đây là một vòng sáng tụ quang.
5) Nếu không có vòng sáng, hãy thực hiện các bước sau:
a) Sử dụng một slide có độ dày chính xác với một đầu mờ một bên.
b) Bôi dầu phần không có đầu mờ hướng về phía tụ quang.
c) Xem phần ảnh phía mờ.
d) Căn giữa điểm sáng của ánh sáng với các ốc định tâm của tụ quang. Điều chỉnh nhẹ ốc định tâm có thể cần thiết khi chuyển sang vật kính có NA cao.
6) Giả sử slide của bạn tất cả cùng độ dày, bạn không nên di chuyển theo chiều dọc
của tụ quang.
Tập trung hình ảnh trong nền đen với NA cao
Với độ phóng đại cao và NA cao, có thể không dễ dàng trong bước đầu tập trung hình ảnh mẫu vật trong nền đen. Điều này đặc biệt đúng nếu mẫu phân bố thưa thớt. Trong trường hợp mẫu vật phân tán, một dấu bút chì sáp trên bề mặt slide là một điểm đánh dấu để tập trung hình ảnh bước đầu. Các bước sau đây sẽ giúp đỡ trong việc tập trung hình ảnh:
1) Bôi dầu tụ quang đến slide
2) Hạ bàn mang mẫu (hoặc nâng cao vật kính) và bôi dầu phần trên của slide
3) Nâng cao bàn mang mẫu (hoặc hạ thấp vật kính) cho đến khi vật kính và dầu vừa chạm nhau
4) Nhìn vào kính hiển vi - bạn sẽ thấy một nền sáng khuếch tán
5) Tập trung hình ảnh đầu tiên bằng cách tăng khoảng cách giữa slide và vật kính (trong trường hợp
bạn đã quá gần) sau đó giảm dần. Khi bạn tập trung, nền sáng này sẽ trở thành
rất sáng sau đó màu xám rồi màu đen
6) Tập trung hình ảnh cho tới khi nền có màu đen và mẫu vật tỏa sáng.